Denne bufferen brukes til å studere DNA-bevegelse
Denne bufferen har en lav ionstyrke og lav bufferingskapasitet. Den passer best til elektroforese av store (> 20 kb) biter av DNA og må byttes ofte eller resirkuleres i lengre (> 4 h) gel-runetider.
Med det i tankene vil du kanskje vurdere flere batcher av bufferen.
Gitt at bufferen er enkel å lage og trinnene kan utføres raskt, bør det ikke være særlig tidkrevende eller vanskelig å trekke ut mer enn ett parti om gangen. Ved å bruke instruksjonene nedenfor, bør det ta bare 30 minutter å lage TAE-bufferen. Dette er hvordan:
Forbered en lagerløsning av EDTA
En løsning av EDTA (etylendiamintetraeddiksyre) fremstilles på forhånd. EDTA vil ikke gå helt inn i en løsning før pH er justert til ca. 8,0. For en 500 milliliter stamløsning av 0,5 M EDTA veier 93,05 gram EDTA dinatriumsalt (FW = 372,2). Oppløs i 400 ml deionisert vann og juster pH med natriumhydroksyd (NaOH). Løs opp løsningen til et sluttvolum på 500 ml.
Pisk opp en lagerløsning av TAE
Lag en konsentrert (50x) stamløsning av TAE ved å veie ut 242 gram Tris base (FW = 121,14) og oppløs den i ca 750 ml deionisert vann.
Tilsett forsiktig 57,1 milliliter istsyre og 100 milliliter 0,5 M EDTA (pH 8,0). Deretter justerer du løsningen til et sluttvolum på 1 liter. Denne stamopløsningen kan lagres ved romtemperatur. PH på denne bufferen er ikke justert og bør være ca. 8,5.
Forbered en arbeidsløsning av TAE
Arbeidsløsningen av 1x TAE-buffer fremstilles ved å fortynne stamløsningen med 50x i deionisert vann.
Endelige oppløsningskonsentrasjoner er 40 mM. Tris-acetat og 1 mM EDTA. Bufferen er nå klar til bruk i å kjøre en agarosegel.
Hva du trenger for bufferen
Siden TAE-bufferen bare krever et raskt og enkelt sett med instruksjoner, er antall materialer som trengs for det ikke overdrevet. Du trenger bare EDTA dinatriumsalt, Tris base og iseddik.
Å lage buffer krever også en pH-måler og kalibreringsstandarder, etter behov. Du trenger også 600 milliliter og 1500 milliliter bønner eller kolber samt graduerte sylindere. Til slutt trenger du deionisert vann, rørstenger og rørplater.
Wrapping Up
Hvor har du tenkt å lage bufferen - på et skoleområde, et arbeidssted, eller et annet sted, for eksempel ditt hjem? Kontroller beholdningen før du begynner å forsikre deg om at du har alle ovenstående materialer til TAE-bufferen.
Hvis du heller ikke trenger å betale for materialer, anbefales det å velge å lage bufferen utenfor ditt hjem. Du kan enkelt bestille materialene du trenger på nettet eller besøke en spesialforretning for dem.