Hvordan lage denne immunhistokjemiske fargepufferen
Fosfatbuffert saltvann (PBS) er en bufferløsning som ofte brukes til immunhistokjemisk (IHC) farging, og brukes ofte i biologisk forskning. PBS er en vannbasert saltløsning som inneholder natriumhydrogenfosfat, natriumklorid og i noen tilfeller kaliumklorid og kaliumdihydrogenfosfat.
Immunohistokjemisk farging
Immunohistokjemi refererer til prosessen med å detektere antigener som proteiner i cellene i en vevseksjon ved å bruke prinsippet om antistoffer som binder spesifikt til antigener i biologiske vev.
Immunfluorescensfarging var den første immunhistokjemiske fargemetoden.
Antigener blir synlige når de er konjugert med antistoffer ved hjelp av fluorescensfarger på grunn av en antigen-antistoffbindingsreaksjon. Denne prosessen oppstår når den aktiveres ved spennende lys av en bestemt bølgelengde under et fluorescerende mikroskop.
Osmolaritet og ionekonsentrasjonen av løsningene stemmer overens med menneskets kropp - de er isotoniske.
En oppskrift på PBS
Du kan forberede PBS på flere måter. Det finnes flere formler. Noen av dem inneholder ikke kalium, mens andre inneholder kalsium eller magnesium .
Denne oppskriften er relativt enkel. Det er for 10X PBS stamløsning (0.1M). Du kan imidlertid også lage en 1X lagerløsning, eller begynn med denne 10X oppskriften og fortynn den til 1X.
Hele prosessen tar omtrent 10 minutter.
Et alternativ til å legge til Tween er også gitt.
Hva du trenger å lage PBS Buffer
- Natriumfosfat monobasisk (vannfritt)
- Natriumfosfatdibasisk (vannfritt)
- Natriumklorid
- Skala og veie båter
- Magnetisk omrører og rørstang
- En pH-probe som er kalibrert og passende løsninger for justering av pH
- 1 liter volumetrisk kolbe
- Tween 20 (valgfritt)
Hvordan lage fosfatbuffert saltvann (PBS)
Vekt 10,9 g vannfri natriumfosfatdibasisk (Na2HPO4), 3,2 g vannfri natriumfosfat monobasisk (NaH2PO4) og 90 g natriumklorid (NaCl).
Løs opp i like under 1 liter destillert vann.
Juster pH til 7,4 og lag oppløsningen til et sluttvolum på 1L.
Fortynn 10X før bruk og juster pH om nødvendig.
Du kan lage en PBS-løsning som inneholder 0,5 prosent Tween 20 ved å tilsette 5 ml Tween 20 til 1L-løsningen.
Tips for å lage PBS buffer
Oppbevar bufferen ved romtemperatur etter at du har gjort PBS-løsningen.
Ikke-vannfrie reagenser kan erstattes, men du må omregne riktig masse av hver for å imøtekomme de tilsatte vannmolekylene.
Bruk av fosfatbuffert saltvann (PBS)
Fosfatbuffert saltvann har mange bruksområder fordi det er isotonisk og ikke-giftig for de fleste celler. Det kan brukes til å fortynne stoffer og det brukes ofte til å skylle beholdere av celler. PBS kan brukes som fortynningsmiddel i forskjellige metoder for å tørke biomolekyler fordi vannmolekylene i det vil bli strukturert rundt stoffproteinet, for eksempel. Det blir "tørket" og immobilisert til en solid overflate.
PH forblir stabil og konsistent for å forhindre ødeleggelse av celler.
Den tynne filmen av vann som binder seg til stoffet, forhindrer denaturering eller andre konformasjonsendringer. Karbonatbuffere kan brukes til samme formål, men med mindre effektivitet.
PBS kan også brukes til å ta et referansespekter ved måling av proteinadsorpsjonen i ellipsometri.