Disse buffere kan brukes til biologiske anvendelser ved nær nøytral pH
De tre pKa-verdiene for fosforsyre (fra CRC-håndboken for kjemi og fysikk) er 2,16, 7,21 og 12,32. Mononatriumfosfat og dets konjugatbase, dinatriumfosfat brukes vanligvis til å generere buffere med pH-verdier rundt 7, for biologiske anvendelser, som vist her.
Å lage denne bufferen er litt vanskeligere enn å lage TAE- og TBE-buffere. Det er imidlertid ikke ekstremt vanskelig. Bare gjennomsnittlig. Det bør ta omtrent 10 minutter å piske opp denne bufferen. Dette er hvordan.
1. Beslut om bufferegenskapene
Før du lager en buffer, bør du først vite hvilken molaritet du vil at den skal være, hvilket volum du skal lage og hva ønsket pH er. De fleste buffere fungerer best i konsentrasjoner mellom 0,1 M og 10 M. pH bør ligge innenfor 1 pH-enhet av syre / konjugatbasis pKa. For enkelhets skyld vil denne prøveberegningen være for 1 liter buffer.
2. Bestem forholdet mellom syre og base
Bruk Henderson-Hasselbalch-ligningen (nedenfor) for å bestemme hvilket forhold av syre til base som er nødvendig for å lage en buffer med ønsket pH. Bruk pKa-verdien nærmest ønsket pH, og forholdet vil referere til syre-base-konjugatparet som tilsvarer den pKa.
HH-ligning: pH = pKa + logg ([Base] / [Acid])
For en buffer med pH 6,9, [Base] / [Acid] = 0,4889
Erstatter for [Syr] og Løs for [Base]
Den ønskede molariteten til bufferen er summen av [Syr] + [Base].
For en 1 M buffer, [Base] + [Acid] = 1 og [Base] = 1 - [Acid]
Ved å erstatte dette i forholdsligningen fra trinn 2 får du:
[Syr] = 0,6712 mol / L
Løs for [Syr]
Ved å bruke ligningen: [Base] = 1 - [Acid], kan du beregne det:
[Base] = 0.3288 mol / L
3. Bland syre- og konjugatbasen
Etter at du har brukt Henderson-Hasselbalch-ligningen for å beregne hvilket forhold syre til base er nødvendig for bufferen din, må du lagre like under 1 liter løsning ved å bruke de riktige mengdene mononatriumfosfat og dinatriumfosfat.
4. Kontroller pH
Bruk en pH-probe for å bekrefte at riktig pH for bufferen er nådd. Juster litt etter behov ved å bruke fosforsyre eller natriumhydroksyd (NaOH).
5. Korriger volumet
Når den ønskede pH er nådd, ta opp volumet av buffer til 1 liter. Fortynn deretter bufferen som ønsket. Den samme bufferen kan fortynnes for å lage buffere på 0,5 M, 0,1 M, 0,05 M eller noe i mellom.
6. Tips til bufferen
Husk at pKa ikke lett måles til en nøyaktig verdi. Litt forskjellige verdier kan være tilgjengelige i litteraturen fra forskjellige kilder.
7. Hva du trenger
For å lage bufferen trenger du tre stoffer, mens de resterende materialene er utstyr. Stoffene er mononatriumfosfat, dinatriumfosfat og fosforsyre eller natriumhydroksyd for å justere pH.
Du trenger også en pH-meter og sonde og passende labware. Dette inkluderer en volumetrisk kolbe, graderte sylindere, bjelker og rørstenger.
Til slutt, du trenger en omrøringsplate.