Hvordan fryse-tørk en bakteriell kultur (lyofilisering)

Lyofilisering, eller frysetørking, er en kort laboratorieprosedyre

Frysetørking, også kalt lyofilisering eller kryosiccation, er prosessen med å fjerne vann fra et produkt etter at det er frosset (og deretter plassert under et vakuum) slik at is kan skifte fra et fast stoff til en damp uten å gå gjennom en væskefase. Is (eller andre frosne løsningsmidler) fjernes fra et produkt gjennom sublimeringsprosessen og bundet vannmolekyler fjernes gjennom desorptjonsprosessen.

Grunnleggende om lyofilisering

En av de beste måtene å lagre bakterie-, sopp-, gjær- eller andre mikroorganismerkultur i lange perioder er å bruke fryse-tørkeprosessen. Denne korte laboratorieprosedyren kan utføres med enhver kommersielt tilgjengelig frysetørker som vil bevare kultursamlingen din. Fordi lyofilisering er den mest komplekse og dyre form for tørking, er prosessen vanligvis begrenset til delikate, varmefølsomme materialer av høy verdi. Stoffer som ikke er skadet ved frysing, kan vanligvis frysetørres slik at kjølelagring ikke er nødvendig.

Denne prosessen kan ta så lite som tre timer, og så lenge som 24 timer, ikke inkludert kulturvekst.

Steg-for-trinn-prosessen med lyofilisering

1. Først, dyrk en overnattningskultur, eller plen, av mikroorganismen på LB eller annen passende næringsmiddel-agarplate.

2. Deretter skal du lage sterile crimp-cap hetteglass ved autoklavering på forhånd, med kappene (gummiproppene) plassert løst på toppen. Plasser papiretiketter trykt med kulturens identifikasjon i rørene før autoklavering. Alternativt, bruk rør med hylster designet for sterilitet .

1. Tilsett 4 ml lyofiliseringsbuffer til platen. Om nødvendig kan cellene suspenderes ved hjelp av en steril glassstang.

2. Raskt overfør kultursuspensjonen til de steriliserte hetteglassene. Tilsett ca. 1,5 ml per hetteglass. Tetning med gummihetten.

3. Frys kultursuspensjonen inne i hetteglassene ved å plassere hetteglassene i en -20 grader Celcius fryser.

1. Når kulturen er frosset, må du forberede frysetørkeren ved å slå den på og la tiden for passende temperatur og vakuumbetingelser stabilisere seg. Gjør dette i henhold til produsentens instruksjoner for det spesielle merket av frysetørker du bruker.

2. Hold forsiktig og aseptisk sett hetteglasshettene løst oppå hetteglassene, slik at fuktighet kan unnslippe under frysetørkingsprosessen, og plasser hetteglassene i et frysetørkekammer. Påfør vakuumet i kammeret i henhold til produsentens anvisninger.

3. La kulturtiden helt lyofilisere (tørke ut). Dette kan ta fra noen timer til natten, avhengig av volumet av hver prøve og hvor mange prøver du har.

4. Fjern prøvene fra frysetørkekammeret i henhold til produsentens instruksjoner, og forsegl hetteglassene med gummihettene, deretter krympetoppen.

5. Oppbevar den lyofiliserte kultursamlingen ved romtemperatur.

Produkter du trenger

• Freeze-tørketrommel
• Næringsstoff eller andre egnede agarplater (og inkubator for å dyrk kultur)
• Glasstav
• Lyofiliseringsbuffer
• Krypterte hetteglass med gummipropper (og en krimper for å påføre dekslene)
• Fryseboks

<sub>Henvisning:

SP Scientific. Grunnprinsipper for frysetørking. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>