Også referert til som RFLP-analyse, utnytter teknikken polymorfismene i de enkelte folks genetiske koder. Selv om alle medlemmer av en art har i det vesentlige samme genetiske sminke, representerer disse små forskjellene variasjoner i fenotype, som utseende eller metabolisme, mellom individer.
RFLP: Analyse Teknikk og applikasjoner
RFLP-analyseteknikk innebærer kutting av en bestemt region av DNA med kjent variabilitet, med restriksjonsenzymer, deretter separering av DNA-fragmentene med agarosegelelektroforese og bestemmelse av antall fragmenter og relative størrelser.
Et restriksjonsenzym er et enzym, et proteinmolekyl, som kutter DNA ved restriksjonsseter. I essens blir DNA-prøven oppdelt og fordøyd av restriksjonsenzymer. De resulterende fragmentene separeres i henhold til deres lengder, og mønsteret av fragmentstørrelser vil variere for hver enkelt testet.
Den fulle RFLP-prosessen krever sondemerking, DNA-fragmentering, elektroforese, blotting, hybridisering, vasking og autoradiografi. Den detekterte RFLP visualiseres ved hjelp av røntgenfilm i en autoradiografi hvor DNA-fragmenter kan sees og analyseres etter at de er separert fra hverandre ved elektroforese.
Noen av søknadene for RFLP-analyse inkluderer:
- DNA fingeravtrykk . Forensic forskere kan bruke RFLP analyse for å identifisere mistenkte basert på bevis prøver samles på scener av forbrytelser.
- Farskap. RFLP brukes også til å bestemme faderskap eller for å oppdage forfedre.
- Genetisk mangfold. Teknikken kan brukes til å studere evolusjon og migrasjon av dyreliv, studere avlsmønstre i dyrepopulasjoner og i påvisning og diagnostisering av visse sykdommer.
Teknikken til å bruke RFLP-deteksjon av variasjon i genomene er et viktig verktøy i genomkartlegging og genetisk sykdomsanalyse. Hvis plasseringen av et bestemt sykdomsgen blir søkt i et bestemt kromosom, vil forskere analysere DNA hos medlemmer av en familie med sykdommen, og deretter se etter lignende arvemønstre i RFLP alleler.
Når et sykdomsgen er lokalisert, kan gjennomføring av RFLP-analyse på andre familiemedlemmer avsløre en bærer av mutantgenene eller signalisere generell sykdomsrisiko. Det er viktig å merke seg at RFLP-teknikken ikke er mye brukt nå som nyere, mer robuste teknikker brukes til DNA-analyse i rettsmedisinske vitenskap og flere andre felt.
Negativt aspekt av analysen
Dessverre er RFLP-analyseteknikken kjedelig og langsom. Bortsett fra å kreve en stor mengde prøve DNA, vil prøven vanligvis være omtrent en kvarts størrelse, noe som er relativt stor for DNA-prøver - prosessen, fra probe merking til vask og autoradiografi, kan ta opp til en hele måneden for å fullføre.
Resultater fra Human Genome Project har ganske mye erstattet behovet for RFLP. Prosjektet ble tillatt for å bestemme hele sekvensen av DNA funnet i humane celler, det menneskelige genom og for å identifisere alle gener i det humane genom.